【實(shí)驗(yàn)原理】
鹽析現(xiàn)象是指—般蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中溶解度下降,故向其溶液中加入中性鹽至一定濃度時(shí),蛋白質(zhì)即自溶液中沉淀析出。鹽析作用與兩種因素有關(guān):
①蛋白質(zhì)分子被濃鹽脫水;
②分子所帶電荷被中和。
蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程,用鹽析方法沉淀蛋白質(zhì)時(shí),較少引起蛋白質(zhì)變性,經(jīng)透析或用水稀釋時(shí)又可溶解。
鹽析不同的蛋白質(zhì)所需中性鹽濃度與蛋白質(zhì)種類及pH有關(guān)。分子量大的蛋白質(zhì)(如球蛋白)比分子量小的(如清蛋白)易于析出。球蛋白在半飽和硫酸銨溶液中即可析出,而清蛋白需在飽和硫酸銨溶液中才能析出。
【 試劑 】
1.雞蛋清的氯化鈉溶液(一份雞蛋清加10份的0.9%氯化鈉溶液)
2.固體硫酸銨
3.10%氫氧化鈉溶液
4..1%硫酸銅溶液
【實(shí)驗(yàn)操作】
1.取雞蛋清氯化鈉溶液約2ml于 試管 中,加入硫酸銨粉末,至硫酸銨飽和不再溶解為止,此時(shí)溶液顏色為乳白色,用濾紙過濾。
2.取濾液做雙縮脲反應(yīng),檢查濾液中有無蛋白質(zhì)存在。
蛋白質(zhì)沉淀用1ml 蒸餾 水溶解后作雙縮脲反應(yīng),證明鹽析的蛋白質(zhì)重新溶解于水而未引起變性。試管編號(hào)1234567
磷酸溶液的濃度(mol/L)124681012
磷酸溶液的加入量(滴)1 1 1 1111
混合溶液的PH值543.532.521.5
鹽析時(shí)(NH4)2SO4
飽和溶液的用量(滴)10766666
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