1．原理
(1)各種色素能溶解在有機(jī)溶劑（無水乙醇等）中形成溶液，使色素從生物組織中脫離出來。
(2)各種色素都能溶解在層析液中，但在層析液中的溶解度不同。溶解度大的色素分子隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，反之則慢，因而不同色素可以在濾紙上通過擴(kuò)散分開，各種色素分子在濾紙上可形成不同的色素帶。
2．實(shí)驗(yàn)過程
觀察結(jié)果：濾紙條上色素帶有四條，由上到下分別是胡蘿卜素、黃色的葉黃素、藍(lán)綠色的葉綠素、黃色的葉黃素、藍(lán)綠色的葉綠素a、黃綠色的葉綠素b，
如圖
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)中幾種化學(xué)藥品的作用
①加入少量SiO2，可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使研磨更充分，便于色素完全釋放。
②加入少量CaCO3，，可以中和細(xì)胞內(nèi)的有機(jī)酸，防止有機(jī)酸奪取葉綠素中的鎂離子使葉綠素破壞，從而起到保護(hù)色素的作用。但SiO2.和CaCO3的加入量要少，否則濾液雜質(zhì)多、混濁、顏色淺，實(shí)驗(yàn)效果差。 2、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵
①葉片要新鮮，顏色要深綠，保證色素的含量。
②研磨要迅速充分。葉綠素不穩(wěn)定，易被破壞，時(shí)間過長(zhǎng)或研磨不充分都會(huì)導(dǎo)致色素的量太少而使實(shí)驗(yàn)失敗。
③濾液細(xì)線不僅要求細(xì)、直、均勻，而且要求含有較多的色素（可以重復(fù)畫二至三次）。
④濾液細(xì)線不能觸及層析液，否則色素溶解到層析液中，將得不到清晰的色素帶。
3、注意事項(xiàng)
①制備濾紙條時(shí)，要剪去兩角，這樣可以減小邊緣效應(yīng)，使色素在濾紙上擴(kuò)散均勻，便于觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 ②收集濾液后，要及時(shí)用棉塞將試管口塞緊，防止濾液揮發(fā)。
4、濾紙條上的濾液細(xì)線，不能觸及層析液的原因：濾紙條上的濾液細(xì)線如觸及層析液，濾紙上的葉綠體色素就會(huì)溶解在層析液中，實(shí)驗(yàn)就會(huì)失敗。
5、提取和分離葉綠體色素的關(guān)鍵：
（1）提取葉綠體色素的關(guān)鍵是：①葉片要新鮮、濃綠；②研磨要迅速、充分；③濾液收集后，要及時(shí)用棉塞將試管口塞緊，以免濾液揮發(fā)。
（2）分離葉綠體色素的關(guān)鍵是：①是濾液細(xì)線要細(xì)且直，而且要重復(fù)劃幾次；②是層析液不能沒及濾液線。
6、收集到的色素濾液綠色過淺，可能原因如下：
①未加二氧化硅，研磨不充分。
②使用放置數(shù)天的菠菜葉，濾液中色素（葉綠素）太少，綠色過淺。
③一次加入大量的95%的乙醇，提取濃度太低（正確做法：分次加入少量95%的乙醇提取色素）。
④未加碳酸鈣或加入過少導(dǎo)致色素分子被破壞。
7、如果濾紙條色素帶重疊，原因可能是濾紙條上的濾液細(xì)線接觸到層析液。
知識(shí)拓展：
實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新：本實(shí)驗(yàn)中的長(zhǎng)條濾紙可以改為圓形濾紙，在濾紙的中央滴一滴濾液，然后用一根浸有層析液的棉線的一端垂直接觸濾液的中必位置，會(huì)得到近似同心的四個(gè)色素環(huán)，由內(nèi)到外依次是黃綠色、藍(lán)綠色、黃色、橙黃色。
例 以“葉綠體中色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)中，下列描述正確的是( )
A．將5g新鮮完整的菠菜葉，放入研缽中，加入無水乙醇、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨
B．用毛細(xì)吸管吸取少量濾液；沿鉛筆線處小心均勻地畫出一條濾液細(xì)線，并連續(xù)迅速地重復(fù)畫2～3次
C．把畫好細(xì)線的濾紙條插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙條上的擴(kuò)散
D．色素分子是有機(jī)物，不溶于水，所以研磨過程中加入無水乙醇是為了溶解色素
答案D
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