原理

　　過氧化物酶廣泛分布于植物的各個組織器官中。在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，可用分光光度計測量生成物的含量。

　　儀器藥品

　　721型分光光度計離心機(jī)

　　秒表天平

　　研缽磁力攪拌器

　　愈創(chuàng)木酚30%過氧化氫

　　20mmol/LKH2PO4

　　100mmol/L磷酸緩沖液，pH6.0（見附表2）

　　反應(yīng)混合液：100mmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)50ml于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚28μl，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入30%過氧化氫19μl，混合均勻，保存于冰箱中。

　　操作步驟

　　1．稱取植物材料1g，加20mmol/LKH2PO45ml，于研缽中研磨成勻漿，以4000r/min離心15分鐘，傾出上清液保存在冷處，殘渣再用5mlKH2PO4溶液提取一次，合并兩次上清液，貯于冷處備用。

　　2．取光徑1cm比色杯2只，于1只中加入反應(yīng)混合液3ml，KH2PO41ml，作為校零對照，另1只中加入反應(yīng)混合液3ml，上述酶液1ml（如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒表記錄時間，于分光光度計上測量吸光度值，每隔1分鐘讀數(shù)一次，讀數(shù)于波長470nm下進(jìn)行。

　　3．以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以△A470/min?mg蛋白質(zhì)（或鮮重g）表示之。蛋白質(zhì)含量測定參閱實驗56。

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