1、PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4中游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸
| 過程 | 說明 | 圖解 |
| 變性 | 當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈 |  |
| 復(fù)性 | 溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合 |  |
| 延伸 | 72℃左右時(shí)，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5'端向3'端延伸 |  |
3、結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。
細(xì)胞被DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：
| 細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制 | 體外DNA擴(kuò)增（PCR） | ||
| 不同點(diǎn) | 解旋 | 在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制 | 80～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開 |
| 酶 | DNA解旋酶、DNA聚合酶 | TaqDNA聚合酶 | |
| 引物 | RNA | DNA、RNA | |
| 溫度 | 體內(nèi)溫和條件 | 高溫 | |
| 相同點(diǎn) | ①需提供DNA模板 ②四種脫氧核苷酸為原料 ③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端 | ||
知識(shí)點(diǎn)撥：
1、DNA分子復(fù)制的人工控制
解開螺旋：在80～100℃時(shí)，DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性。
恢復(fù)螺旋：在50～60℃左右時(shí)，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。
復(fù)制條件：緩沖液，DNA模板、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種引物。
控制儀器：PCR儀（溫度周期性自動(dòng)調(diào)節(jié)儀）。
2、PCR的含義是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。
3、PCR技術(shù)反應(yīng)的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③合成引物；④四種脫氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥溫控設(shè)備
4、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是快速、高效、靈活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)是：耐高溫。
知識(shí)拓展：
1、DNA含量的測(cè)定??分光光度法
| 項(xiàng)目 | 說明 | |
| 原理 | DNA在260nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈吸收峰，峰值大小與DNA的含量是正相關(guān) | |
| 過程 | 稀釋 | 2μLPCR反應(yīng)液，加入98μL蒸餾水，即將樣品進(jìn)行50倍稀釋 |
| 對(duì)照調(diào)零 | 以蒸餾水作為空白對(duì)照，在波長260nm處，將紫外分光光度計(jì)的賭注調(diào)節(jié)至零 | |
| 測(cè)量 | 取DNA稀釋液100μL至比色杯中，測(cè)定260nm處的光吸收值 | |
| 計(jì)算 | DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的讀數(shù)）×稀釋倍數(shù) | |
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