高中各科目的學習對同學們提高綜合成績非常重要,大家一定要認真掌握,小編為大家整理了高中生物實驗DNA的粗提取和鑒定實驗中應注意的問題,希望同學們學業(yè)有成!
1.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。因為雞血細胞破碎后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,細胞內(nèi)DNA的含量比較少,如果被玻璃窖吸附卻一部分,提取的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。
2.獲取較純凈的DNA的關鍵步驟。
⑴充分攪拌雞血細胞液。DNA存在于雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合后,必須用玻璃棒沿一個方向快速攪拌,使雞血細胞加速破裂,并釋放出DNA。
⑵沉淀DNA時必須用冷酒精。實驗前必須準備好大量的體積分數(shù)為95%的酒精,并在冰箱中至少存放24h。
⑶正確攪拌含有懸浮物的溶液。實驗步驟3、5、7都需要用玻璃棒攪拌。在進行步驟3、5時,玻璃棒不要直接接觸燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的DNA分子。進行步驟7時,要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉動5min~10min。
3.本實驗中鑒定DNA的方法為二苯胺法。如果在沒有二苯胺的情況下也可以用以下幾種方法。
⑴配制染色劑。用蒸餾水配制0.05%的溴化乙錠(EB)溶液。
⑵將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上,再滴1滴EB溶液染色。
⑶將蠟紙放在紫外燈(260nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的熒光(DNA的紫外吸收高峰在260nm處)。
4.典例解析
1.下列關于“DNA的粗提取與鑒定”的實驗原理中,說法錯誤的是
A.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變
B.利用DNA不溶于酒精的性質,可除去細胞中溶于酒精的物質而得到較純的DNA
C.DNA是大分子有機物,不溶于水而溶于某些有機溶劑
D.DNA溶液中加入二苯胺試劑經(jīng)沸水浴后會出現(xiàn)藍色反應
解析:該實驗依據(jù)的原理是A、B、D,DNA不溶于酒精(屬有機溶劑),C說法錯誤。
答案:C
2.下列關于實驗操作的說法中,有誤的是( )
A.該實驗中有兩次加入蒸餾水,均是為了析出DNA
B.該實驗學生操作中多次用到攪拌,除最后一步未強調方向外,其余均要求單向攪拌
C.該實驗中有3次過濾,過濾時使用紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關
D.實驗三次加入NaCl溶液,無論濃度是2mol/L,還是0.015mol/L,均是為了溶解DNA
解析:對照比較表可知,除A說法有誤外,其余各項均正確。兩次加蒸餾水,第一次是為了使細胞吸水破裂釋放出核物質(DNA),第二次是為了降低NaCl溶液的濃度從而析出DNA。
答案:A
3.填寫本實驗操作過程中所用試劑。
⑴提取雞血細胞中核物質: ;
⑵溶解核內(nèi)DNA: ;
⑶析出溶液中的DNA: ;
⑷DNA粘稠物的再溶解: ;
⑸提取雜質較少的DNA白色乳狀絲狀物: ;
⑹鑒定DNA是否存在可用試劑: 。
解析: ⑹鑒定DNA是否存在常用:二苯胺試劑沸水浴為藍色反應;也可選用甲基綠試劑,其顏色反應為藍綠色。(其它略)
答案:⑴蒸餾水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸餾水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精 ⑹二苯胺試劑或甲基綠試劑
以上就是為大家整理的高中生物實驗DNA的粗提取和鑒定實驗中應注意的問題,希望同學們閱讀后會對自己有所幫助,祝大家閱讀愉快。
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