除了課堂上的學(xué)習(xí)外，平時的積累與練習(xí)也是學(xué)生提高成績的重要途徑，本文為大家提供了高中生物實驗之細胞培養(yǎng)一般方法，祝大家閱讀愉快。

1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;

2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時以上;

3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取完全培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;

4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,分裝成支置-20度保存;

5.各種炒嫻囊禾甯次率庇Ρ咭”呷諢?否則有的液體(特別是培養(yǎng)基)容易產(chǎn)生沉淀.

6.培養(yǎng)箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應(yīng)照射1小時以上,如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來菌).至少每月一次.

7.進入操作時應(yīng)注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時注意無菌臺內(nèi)空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數(shù)量較多,培養(yǎng)瓶應(yīng)放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離,開瓶(蓋)時應(yīng)先用75%酒精反復(fù)擦拭或用燈燒,開開后應(yīng)用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點.

復(fù)蘇:

1.應(yīng)遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.

2.在無菌臺內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).

傳代:

1.貼壁細胞:

對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化, (根據(jù)配制強度經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?

2.懸浮細胞:

一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入完全培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).

為大家整理的高中生物實驗之細胞培養(yǎng)一般方法就到這里，同學(xué)們一定要認真閱讀，希望對大家的學(xué)習(xí)和生活有所幫助。

本文來自：逍遙右腦記憶 http://yy-art.cn/gaozhong/145029.html

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